L atar belakang: Penyebab utama karies gigi salah satunya disebabkan oleh bakteri Streptococcus mutans. Obat kumur yang menjadi gold standard untuk menghambat bakteri di dalam rongga mulut adalah klorheksidin glukonat 0,2%. Klorheksidin glukonat 0,2% dapat memicu reaksi alergi dan noda pada gigi apabila pemakaian dalam jangka waktu lama. Minyak atsiri kayu cendana india merupakan bahan alam yang memiliki sifat antiinflamasi, antimikroba, dan antiproliferatif dengan efek samping yang lebih kecil. Tujuan: Untuk mengetahui efek minyak atsiri kayu cendana India dalam menghambat pertumbuhan biofilm Streptococcus mutans ATCC 25175. Metode: S. mutans ATCC 25175 dikultur pada nutrient broth dan diinkubasi pada suhu 37° C selama 24 jam. Pembuatan biofilm dilakukan dengan cara menginokulasi kultur ke dalam 96-well plate dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37° C. kemudian dilakukan pembuatan konsentrasi minyak atsiri kayu cendana india 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125%, dan 1,56%. Uji biofilm S. mutans menggunakan metode biofilm assay dengan waktu 15 dan 30 menit dengan kontrol positif klorheksidin glukonat 0,2%. Hasil uji biofilm didapat menggunakan microplate reader dengan melihat nilai optical density dengan panjang gelombang 595 nm. Hasil: Minyak atsiri kayu cendana india dengan konsentrasi 1,56% menunjukkan bahwa konsentrasi dalam menghambat biofilm Streptococcus mutans ATCC 25175. Hasil uji ANOVA menyatakan bahwa pada masa inkubasi 15 menit dan 30 menit terdapat perbedaan bermakna pada tiap kelompok konsentrasi. Kesimpulan: Minyak atsiri kayu cendana india (Santalum album Linn) terbukti dapat menghambat pertumbuhan biofilm Streptococcus mutans ATCC 25175.