K aries adalah salah penyakit paling umum bagi kesehatan rongga mulut diIndonesia. Streptococcus mutans adalah bakteri penyebab utama terjadinya kariesgigi. Sarang semut (Myrmecodia pendans) adalah tanaman herbal yang telahbanyak diketahui dan dimanfaatkan untuk mengobati berbagai penyakit.Penelitian tentang kandungan kimia sarang semut seperti flavonoid dan taninsebagai antibakteri mendasari penelitian ini untuk melihat efek ekstrak sarangsemut terhadap biofilm S. mutans secara in vitro. Kultur dari S. mutans ATCC3198 didistribusikan ke dalam 96-well-flat-bottom microplate ketika opticaldensity mencapai 0,3 (1x107 cfu/mL). Pengencerkan awal ekstrak sarang semutdilakukan dengan DMSO 10% kemudian pengeceran berkala dengan BHI brothsehingga terbentuk ekstrak dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5% dan6,25% lalu didistribusikan ke wel-platel. Jumlah biofilm dihitung dari jumlahekstraksi kristal ungu yang berada dalam microplate dengan menambahkan etanol96% dan absorban dihitung pada gelombang 600 nm dengan microplate readerselama empat masa inkubasi yaitu 1 jam, 3 jam, 6 jam, dan 24 jam dalam suasanaanaerob. Terdapat penurunan optical density dari biofilm setelah diberikan ekstraksarang semut. Dari hasil penelitian terlihat bahwa konsentrasi terbaik dalammenghambat biofilm S. mutans adalah pada konsentrasi 50% dengan masainkubasi 1 jam. Hasil uji ANOVA satu jalan and uji Post Hoc LSD menunjukkanadanya perbedaan bermakna (p < 0,05) pada beberapa konsentrasi dan masainkubasi. Penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak sarang semut memiliki efekhambat terhadap biofilm S. mutans dan dapat berguna sebagai bahan aktif obatyang dapat mencegah karies.