L atar belakang: Enterococcus faecalis dan Porphyromonas gingivalis adalah bakteri penyebab karies dan penyakit periodontal. Stroberi kaya akan berbagai mineral, vitamin, juga berfungsi antibakteri dan antioksidan. Tujuan: Untuk mengetahui efek hambat ekstrak stroberi terhadap pertumbuhan biofilm monospesies dan multispesies bakteri Enterococcus faecalis dan Porphyromonas gingivalis in vitro. Metode: Kultur dari Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 diinkubasi dalam BHI broth 24jam, 37C, dalam suasana anaerob, kemudian didistribusikan ke well untuk membentuk biofilm. Masukkan 200L untuk biofilm monospesies serta masing-masing 100L Enterococcus faecalis dan Porphyromonas gingivalis untuk biofilm multispesies. Stroberi dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25% ditambahkan ke well kemudian efek hambat diobservasi dengan masa inkubasi 1jam, 3jam, 6jam, dan 24jam. Biofilm tanpa stroberi digunakan sebagai negatif kontrol. Kristal violet dan safranin 0,5%w/v digunakan untuk menghitung sisa biofilm kemudian dihitung menggunakan ELISA reader pada 450nm dan 490nm setelah menambahkan etanol 90% sebanyak 200L. Hasil: Hasil penelitian terlihat adanya penurunan optical density dengan ekstrak stroberi. Konsentrasi terbaik dalam menghambat biofilm Enterococcus faecalis dan Porphyromonas gingivalis adalah ekstrak stroberi 100% dengan masa inkubasi 6jam, pada biofilm multispesies adalah ekstrak stroberi 100% dengan masa inkubasi 24jam. Hasil uji one way Anova menunjukan adanya perbedaan signifikan (p < 0,05) pada beberapa konsentrasi dan masa inkubasi. Kesimpulan: Penelitian ini membuktikan bahwa ekstrak stroberi efektif dalam menghambat biofilm Enterococcus faecalis dan Porphyromonas gingivalis sehingga dapat menjadi salah satu andalan terapi alam dalam mencegah karies dan penyakit periodontal.