P revalensi penyakit periodontal mencapai 90% dari jumlah populasi dunia. Gingivitis merupakan bentuk penyakit periodontal yang paling ringan dan disebabkan oleh akumulasi plak. Salah satu bakteri yang memicu pembentukan plak ialah Streptococcus sanguinis. Lemon mengandung fenolat, flavonoid, vitamin, dan minyak esensial yang memiliki sifat antioksidan, anti-inflamasi, antitumor, dan aktivitas antimikroba. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya pengaruh air perasan lemon (Citrus limon) terhadap viabilitas biofilm S. sanguinis secara in vitro. Buah lemon yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari perkebunan Naga di daerah Lembang, Jawa Barat. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium MiCore Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Trisakti pada September hingga November 2016. Jenis penelitian ini adalah eksperimental laboratoris dengan metode uji biofilm. Digunakan Brain Heart Infusion-Broth sebagai kontrol negatif, klorheksidin 0.2% sebagai kontrol positif, air perasan buah lemon dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12.5%, 6.25%, 3.12%, 1.5%, dan 0.78%. Microplate diinkubasi selama tiga masa inkubasi yang berbeda yaitu 1 jam, 6 jam, dan 24 jam dalam suasana anaerob. Hasil kerapatan populasi bakteri (Optical density) dibaca dengan microplate reader pada panjang gelombang 490nm. Hasil penelitian menunjukkan terjadinya penurunan OD setelah diberikan air perasan buah lemon. Pada uji normalitas menunjukkan bahwa data terdistribusi normal (p>0,05). Uji one way ANOVA dan uji Post Hoc menunjukkan adanya perbedaan signifikan (p< 0,05). Penelitian ini menunjukkan bahwa air perasan buah lemon mampu menghambat viabilitas biofilm S. sanguinis secara in vitro. Konsentrasi terbaik dalam menghambat viabilitas biofilm Streptococcus sanguinis secara in vitro adalah konsentrasi 100% pada masa inkubasi 1 jam yang terbukti lebih efektif dibandingkan klorheksidin.