L atar Belakang: Produksi reaktif oksigen spesies (ROS) yang berlebihan memiliki sifat yang beracun bagi sel kanker. Senyawa aktif flavonoid daun serai dapur berfungsi menargetkan jalur sinyal ROS yang dapat menginduksi apoptosis sel kanker HSC-3. Daun serai dapur (Cymbopogon citratus) dengan senyawa aktif flavonoid, disintesis dengan partikel silver dan dimodifikasi fisik menjadi nanopartikel diketahui dapat meningkatkan stabilitas dan efektifitas senyawa aktif daun C. citratus dalam meningkatkan produksi ROS sel HSC-3. Tujuan: Mengetahui pengaruh nanopartikel silver ekstrak etanol daun serai (AgNPDSD) dalam meningkatkan produksi ROS sel HSC-3. Metode: Penelitian secara in vitro terbagi menjadi sepuluh kelompok, yaitu kelompok tanpa perlakuan, doksorubisin, hidrogen peroksida (H2O2), partikel silver, ekstrak daun C. citratus, serta lima kelompok perlakuan AgNPDSD sel HSC-3 dengan konsentrasi 100, 200, 300, 400, dan 500 ppm. Semua kelompok perlakuan diberikan pewarnaan 2’,7’ Dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCFDA) dan 4’,6-diamidino-2- phenylindole (DAPI), lalu diamati dibawah mikroskop fluoresens dan hitung jumlah sel terfluoresensi hijau menggunakan image J software. Hasil: Kelompok doksorubisin dan hidrogen peroksida memperlihatkan perbedaan nyata (p<0,05) dengan semua kelompok. Kelompok pembanding meskipun tidak memperlihatkan perbedaan yang nyata, namun memperlihatkan produksi ROS lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol negatif. Kelompok perlakuan AgNPDSD meskipun tidak memperlihatkan perbedaan nyata, namun kelompok AgNPDSD 400 ppm memperlihatkan peningkatkan produksi ROS yang lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok AgNPDSD lainnya diikuti dengan 500, 300, 200, dan 100 ppm. Kesimpulan: AgNPDSD mampu meningkatkan produksi ROS sel HSC-3 dengan konsentrasi terbaik pada 400 ppm.