P enyakit periodontal merupakan kelainan jaringan penyangga gigi yang memiliki prevalensi cukup tinggi di masyarakat Indonesia yaitu 96,58%. Bakteri penyebab penyakit periodontal yang utama merupakan bakteri Gram negatif yang salah satunya adalah A. Actinomycetemcomitans. Biofilm rongga mulut merupakan kumpulan sel bakteri yang melekat pada permukaan jaringan dan tertutup oleh polimer matriks ekstraseluler (EPS) yang dapat 100 hingga 1000 kali lebih resisten dibandingkan dengan bakteri pada planktonik. Tanaman sarang semut (Myrmecodia pendans) memiliki kandungan flavonoid dan tanin yang berperan sebagai antibakteri, Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya hambat ekstrak M.pendans terhadap biofilm A.actinomycetemcomitans. Penelitian yang dilakukan adalah eksperimental laboratorium menggunakan metode biofilm assay dengan ekstrak etanol M.pendans konsentrasi 100%, 50%, 25% dan 12,5%, kontrol positif (klorheksidin glukonate 0,2% Minosep®) dan kontrol negatif (BHI-B). Ekstrak M.pendans didistribusikan ke dalam 96 well-plate yang sebelumnya berisi bakteri A.actinomycetemcomitans, kemudian diinkubasi dalam 3 masa inkubasi yaitu 1 jam, 6 jam, dan 24 jam pada suasana anaerob. Hasil uji berupa Optical Density (OD) dibaca dengan alat Safas microplate reader pada panjang gelombang 490 nm. Penelitian ini menunjukkan adanya perbedaan bermakna (p <0,05) antara masing masing kelompok konsentrasi dan kontrol negatif. Terlihat bahwa konsentrasi ekstrak terbaik adalah pada konsentrasi 100% pada masa inkubasi 24 jam.