C andida albicans merupakan jamur yang berperan penting dalam terjadinya penyakit kandidiasis. Jamur ini paling sering dikaitkan dengan pembentukan biofilm. Pembentukan biofilm dapat menyebabkan dampak yang besar karena peningkatan resistensinya pada terapi antijamur dan kemampuan sel dalam biofilm yang berfungsi untuk melawan sistem pertahanan imun sel hospes dan perannya pada infeksi. Daun sirih memiliki berbagai macam kandungan di dalamnya. Kandungan yang bersifat antifungi adalah hidroksikavikol dan eugenol. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui bagaimana efek ekstrak etanol daun sirih hijau {Piper betle L.) terhadap biofilm Candida albicans. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik secara in-vitro. Pengujian dilakukan terhadap ekstrak etanol daun sirih dengan variasi konsentrasi 3.125%, 6.25%, 12.5%, 25%, 50%, 100% disertai kontrol negatif (Brain Heart Infusion (BHI) Broth) dan kontrol positif (nistatin) dengan metode biofilm assay yang menggunakan microplate 96-well. Hasil dari biofilm kemudian diukur dengan microplate reader pada densitas optik 490 nm. Berdasarkan hasil analisis data dengan menggunakan uji Shapiro-Wilk dilanjutkan uji One-Way ANOVA dan uji Post Hoc menunjukkan adanya perbedaan efek yang bermakna (p < 0.05) antara berbagai konsentrasi ekstrak etanol daun sirih hijau terhadap biofilm Candida albicans. Pada konsentrasi ekstrak 100% menunjukkan adanya perbedaan efek yang bermakna dengan konsentrasi ekstrak 3.125%, 6.25%, 12.5%, 25%, 50%. Ekstrak etanol daun sirih hijau dengan konsentrasi 3.125%, 6.25%, 12.5%, 25%, 50%, 100% dapat menghambat bioftlm Candida albicans.