L atar belakang: Periodontitis dapat menyebabkan menurunnya kualitas hidup seseorang dengan menyebabkan kehilangan gigi sehingga sulit untuk makan dan menurunnya tingkat percaya diri. Treponema denticola merupakan bakteri yang berperan penting dalam terjadinya periodontitis. Kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) mengandung flavonoid, alkaloid, saponin, dan tanin yang diharapkan dapat menurunkan pembentukan biofilm penyebab periodontitis. Tujuan: Untuk mengetahui pengaruh ekstrak kulit buah naga merah terhadap pembentukan biofilm T. denticola. Metode: Eksperimental laboratoris menggunakan post-test control group design secara in vitro dengan metode biofilm assay. Penelitian ini menggunakan ekstrak kulit buah naga merah dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125%, dan 1,5625%, klorheksidin 0,2% sebagai kontrol positif, dan BHI-B sebagai kontrol negatif. Ekstrak didistribusi ke dalam well-plate dan diinkubasi selama 1, 3, dan 24 jam. Optical density biofilm dibaca menggunakan microplate reader. Hasil: Ekstrak kulit buah naga merah konsentrasi mulai dari 25% pada inkubasi 1 jam mampu menghambat biofilm lebih efektif dibandingkan kontrol positif. Pada inkubasi 3 jam dan 24 jam menunjukan konsentrasi mulai dari 12,5 % mampu menghambat biofilm lebih efektif dibandingkan kontrol positif. Kesimpulan: Ekstrak kulit buah naga merah dapat menghambat pembentukan biofilm T. denticola.