L atar belakang : Periodontitis merupakan penyakit periodontal berupa inflamasi pada jaringan pendukung gigi disebabkan oleh bakteri. Salah satu bakteri yang berperan dalam terjadinya periodontitis adalah Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Air perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Chrism.) Swingle) merupakan bahan alami yang memiliki efek farmakologis yang salah satunya berfungsi sebagai antibakteri. Metode Penelitian ini adalah eksperimental laboratorium menggunakan metode difusi dengan teknik sumuran. Penelitian ini menggunakan 6 perlakuan yaitu air perasan jeruk nipis konsentrasi 100%, 50%, 25% dan 12,5%, kontrol positif (Klorheksidin 0,2%) dan kontrol negatif (Akuades). Pada medium BHI ( Brain Heart Infusion) Agar yang telah dioles bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans dibuat sumuran untuk menempatkan Klorheksidin, Aquades dan sampel dari air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 100%, 50%, 25% dan 12,5% (masing-masing dilakukan sebanyak triplo). Medium tersebut diinkubasi dalam inkubator dengan anaerob jar pada suhu 37°C dan dilakukan pengamatan selama 3x24 jam kemudian zona hambat yang terbentuk diukur. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan uji Shapiro-Wilk, kemudian dilanjutkan dengan uji parametrik ANOVA satu jalan, Post-Hoc, lalu LSD / Tukey. Hasil : Rata-rata zona hambat air perasan jeruk nipis konsentrasi 100%, 50%, dan 25% terhadap Aggregatibacteractinomycetemcomitans yaitu sebesar 10,77 mm, 10,21 mm, 8.01 mm, dan tidak ditemukan adanya zona hambat pada konsentrasi 12,5% sedangkan zona hambat klorheksidin terhadap Aggregatibacter actinomycetemcomitans adalah 10,75 mm. Kesimpulan Air perasan jeruk nipis memiliki daya hambat tehadap pertumbuhan Aggregatibacter actinomycetemcomitans.