I ndustri minyak bumi merupakan salah satu industri yang potensial menimbulkan dampak negatif terhadap lingkungan apabila melebihi baku mutu yang ada. Ceceran minyak bumi, sebagai sumber pencemar ini merupakan limbah jenis B3 (bahan berbahaya, dan beracun), yaitu sisa suatu usaha atau kegiatan sebagai hasil pencampuran bahan kimia pada saat pengolahan tetapi (toksik, mudah terbakar, reaktif, dan korosif) pada konsentrasi rendah dapat mencemarkan lingkungan hidup, dan membahayakan kesehatan manusia serta makhluk hidup lainnya baik secara langsung maupun tidak langsung. Penelitian ini untuk menyisihkan kandungan senyawa hidrokarbon pada minyak bumi dengan memanfaatkan kultur campuran bakteri Thiobacillus sp. dan Clostridium sp. dalam media cair Stone Mineral Salt Solution (SMSs). Ada dua tahapan yaitu preparasi media cair dan uji degradasi minyak bumi oleh Thiobacillus sp. dan Clostridium sp. dalam media cair. Penelitian ini diawali dengan kultivasi kultur campuran bakteri dan pengujian kepekaan bakteri kultur campuran terhadap media yang mengandung minyak bumi dan hal ini mebuktikan bahwa kultur campuran Thiobacillus sp. dan Clostridium sp. bersifat resisten terhadap pencemar minyak bumi. Optimasi kondisi lingkungan dalam media cair dilakukan dengan tiga kondisi, yaitu pH, konsentrasi kultur campuran bakteri Thiobacillus sp. dan Clostridium sp., dan waktu kontak. Variasi yang dilakukan antara lain nilai keasaman (pH) 5, 7, 9; konsentrasi bakteri (%, v/v) 10, 15, 20; waktu kontak (hari) 7, 14, dan 21. Analisis yang digunakan dengan metode gravimetri dalam menentukan kandungan Total Petroleum Hydrocarbon (TPH). Hasil penyisihan tertinggi yang didapatkan sebesar 96,85 % (w/w) terjadi pada kondisi pH 7. Penambahan konsentrasi bakteri mampu menyisihkan sebesar 94,60% (w/w) pada kondisi optimum dengan penambahan 15% (v/v), dan kondisi waktu kontak selama 14 hari dengan penyisihan tertinggi sebesar 96,98% (w/w). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa bakteri Thiobacillus sp. dan Clostridium sp. mampu bertindak sebagai agen bioremediasi dalam menyisihkan kadar Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) oleh minyak bumi. Pada batch kontrol ini dalam tidak terjadi penyisihan lebih dari 10% yang membuktikan bahwa faktor fisik kimia juga tidak terlalu berperan dalam mendegradasi senyawa hidrokarbon.