K egiatan tambang batubara merupakan kegiatan dengan daya ubah lingkungan yang sangat besar sehingga menimbulkan permasalah pada lingkungan. Air hujan dan air tanah yang tercampur dengan batuan yang mengandung sulfida akan mendorong terjadinya oksidasi mineral sulfidik dan melepaskan asam sulfat menyebabkan penurunan pH secara drastis sehingga disebut Acid Mine Drainage atau Air Asam Tambang (AAT). AAT menjadi salah satu permasalahan pencemaran lingkungan karena memiliki sifat yang berbahaya yaitu memiliki keasaman yang sangat tinggi (pH < 3) dan mengandung konsentarasi logam yang tinggi, terutama kadar besi terlarut. Penelitian ini bermaksud untuk mengetahui peningkatan pH dan penurunan kadar besi terlarut dalam AAT oleh kultur campuran bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Brevibacterium sp. pada skala laboratorium sebagai dasar untuk bioremediasi secara ex situ. Penelitian ini terdiri dari dua tahap yaitu tahap preparasi yaitu preparasi AAT, media pertumbuhan bakteri, kultivasi bakteri, uji sensitivitas dan dilanjutkan tahap penelitian inti dengan uji netralisasi AAT. Hasil uji sensitivitas menunjukkan campuran bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Brevibacterium sp. bersifat resisten atau tidak peka terhadap AAT. Hal ini dibuktikan dengan tidak terbentuknya zona hambat di sekitar kertas cakram yang mengandung AAT. Uji netralisasi AAT dilakukan di media cair SMSs dengan dua variasi yaitu konsentrasi AAT (%;v/v) 10,15, 20 dan 25 dan waktu kontak (jam) 48, 96, 144 dan 192. Netralisasi AAT oleh kultur campuran bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Brevibacterium sp. dalam media SMSs terjadi paling baik pada konsentrasi sebesar 10% (v/v), dengan waktu kontak selama 96 jam. Peningkatan pH yang diperoleh yaitu 18%, efisiensi penyisihan logam besi terlarut yaitu 89,38%. Dalam uji netralisasi AAT dengan variasi waktu kontak didapat pada waktu kontak yang paling baik adalah 144 jam dengan peningkatan pH sebesar 14% dan efisiensi penyisihan logam besi sebesar 88,46%.