A lternatif upaya pemanfaatan serangga yang merugikan seperti Kumbang Tanduk (Xylotrupes gideon L) dengan cara pengolahan menjadi nano kitosan yang memiliki khasiat yang lebih baik sebagai anti bakteri dan anti jamur, sehingga saat ini banyak penelitian mengarah pada nano kitosan. Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri yang banyak mengkontaminasi sistem saluran air dental unit dan peralatan kedokteran gigi, yang bersifat oportunistik dan penyebab infeksi nosokomial. Tujuan penelitian ini untuk menguji efektivitas anti bakteri nano kitosan dari eksoskeleton kumbang tanduk (Xylotrupes Gideon L) terhadap pertumbuhan P.aeruginosa ATCC 27853. Penelitian eksperimental ini dilakukan dengan metode difusi cakram, dengan beberapa konsentrasi 3000 ppm, 2000 ppm, 1000 ppm, 500 ppm, 250 ppm dan 2 kelompok kontrol yaitu kontrol positif dan negatif. Analisis data statistik menggunakan uji Normalitas , uji ANOVA 1 jalan, dan uji Tuey HSD. Hasil penelitian memperlihatkan terbentuknya zona hambat nano kitosan terhadap pertumbuhan P aeruginosa pada konsentrasi yang berbeda. Semakin tinggi konsentrasi nano kitosan yang digunakan semakin besar zona hambat yang terbentuk dalam menghambat pertumbuhan P.aeruginosa.