N ano kitosan merupakan modifikasi fisik kitosan yang memiliki peran dalammenghambat pertumbuhan mikroorganisme, termasuk bakteri patogen di dalammulut, seperti Staphylococcus aureus yang menyebabkan infeksi abses apikalisakut. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi karakteristik kitosan darieksoskeleton kumbang tanduk yang telah dilakukan modifikasi fisik menjadinano partikel, dan menguji efektivitas nano kitosan sebagai antibakteri dalammenghambat pertumbuhan S.aureus. Pengujian partikel nano menggunakan ujiParticle Size Analyzer (PSA) dan uji Scanning Electron Microscope (SEM),sedangkan untuk uji efektivitas nano kitosan dilakukkan dengan metode difusimenggunakan kertas cakram, dengan konsentrasi 3000 ppm, 1500 ppm, 750 ppm,375 ppm, 250 ppm, dan 188 ppm. Berdasarkan hasil uji PSA membuktikan hasilmodifikasi fisik kitosan memiliki ukuran partikel nano dengan rata-rata ukuranpartikel sebesar 296,75 nm, gambaran mikroskopis dapat dilihat menggunakan ujiSEM pada pembesaran 1000x. Uji efektivitas nano kitosan dalam menghambatpertumbuhan S.aureus dapat dilihat dengan perbedaan diameter zona yangterbentuk pada beberapa konsentrasi nano kitosan. Berdasarkan uji statistikmenunjukkan adanya perbedaan yang bermakna (P<0,05) pada masing-masingkonsentrasi, hal ini membuktikan bahwa modifikasi fisik kitosan kumbang tandukmenjadi nano partikel dapat menghambat pertumbuhan S.aureus, yangmemperlihatkan semakin tinggi konsentrasi nano kitosan yang digunakanberbanding lurus dengan zona hambat yang terbentuk. Pada penelitian inikonsentrasi yang membentuk zona hambat tertinggi pada 3000 ppm dankonsentrasi terendah pada 188 ppm.