L Latar Belakang : Nano kitosan dan nano kalsium merupakan suatu inovasi baru yang dipercaya dapat meningkatkan kinerja bahan alami kitosan yang bekerja sebagai antibakteria yang biodegradable, biocompatible, dan non-toxic, serta meningkatkan kineija kalsium yang berguna sebagai mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan gigi. Streptococcus mutans merupakan salah satu pemicu utama terbentuknya karies gigi karena kesehatan gigi dan mulut yang kurang terjaga. Rencana penelitian ini adalah eksperimental laboratorik. Sampel yang digunakan adalah Streptococcus mutans yang telah di setarakan dengan standard McFarland. Melihat pertumbuhan Streptococcus mutans menggunakan metode dilusi. Tujuan : untuk mengetahui efektifitas formulasi obat kumur mengandung nano kitosan dan nano kalsium yang berasal dari eksoskeleton kumbang tanduk (Xylotrupes gideon) dalam menurunkan kuantitas Streptococcus mutans. Metode : Sampel dimasukkan ke beberapa konsentrasi obat kumur selama 24 jam lalu dipindahkan ke media agar darah dan di inkubasi anaerob selama 24, 48, 72 jam dengan suhu 37°C dan dilihat menggunakan metode dilusi. Hasil : Tidak ada pertumbuhan kolonisasi yang terjadi pada Streptococcus mutans di konsentrasi 500 ppm, 250pm, dan 125 ppm. Kesimpulan : Formulasi obat kumur mengandung nano kitosan dan nano kalsium efektif dalam menghambat pertumbuhan kolonisasi Streptococcus mutans pada konsentrasi tinggi.