K Kumbang tanduk (Xylotrupes gideon) atau dikenal sebagai hama pengerek pucuk kelapa sawit yang banyak dijumpai di Indonesia. Kitosan dan Kalsium salah satu bahan polimer alami yang diperoleh dari zat kitin pada eksoskeleton kumbang tanduk (Xylotrupes gideon) melalui proses deasitilisasi dan demineralisasi. Kitosan dan Kalsium mampu meningkatkan kekerasan email dan menghambat proses demineralisasi, salah satunya akibat penggunaan bahan pemutih gigi. Penelitian yang dilakukan berupa uji laboratoris (in vitro). Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh pretreatmenX nano kitosan dan nano kalsium kumbang tanduk pada aplikasi home bleaching terhadap kekerasan email gigi. Penelitian ini menggunakan sampel 36 gigi premolar yang dibagi menjadi 4 kelompok; AO sebagai control (hanya direndam saliva), A1 dilakukan pengaplikasian home bleaching tanpa pretreatment dengan nano kitosan maupun nano kalsium, A2 dilakukan pretreatment dengan nano kitosan, dan A3 dilakukan pretreatment dengan nano kitosan dan nano kalsium. Kelompok A2 dan A3 dibagi menjadi 3 subkelompok berdasarkan perbedaan konsentrasi 4000ppm, 6000ppm, dan 8000ppm. Hasil uji statistik one way anova menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna pada kelompok yang diberi pretreatment nano kitosan dan nano kalsium kumbang tanduk pada aplikasi home bleaching terhadap kekerasan email gigi (p<0.05). Kesimpulan dari penelitian ini adalah pretreatment menggunakan kombinasi nano kitosan dengan nano kalsium terbukti lebih efektif dalam meningkatkan kekerasan email dibandingkan pretreatment dengan nano kitosan tanpa nano kalsium. Peningkatan konsentrasi pada nano kitosan dan kombinasi nano kitosan dengan nano kalsium terbukti mampu meningkatkan kinerja kitosan dalam meningkatkan kekerasan email gigi.