L Latar belakang: Streptococcus mutans merupakan bakteri penyebab utama terbentuknya karies dan dapat membentuk biofilm yang dapat meningkatkan kemampuan bakteri dan melindungi dari antimikroba. Biji alpukat (Persea americana) mengandung flavonoid, saponin, dan tannin yang memiliki aktivitas antibkateri. Tujuan: Mengetahui efek ekstrak etanol biji alpukat terhadap perlekatan biofilm Streptococcus mutans pada permukaan email gigi secara ex vivo. Metode: Lima belas gigi premolar rahang bawah yang diekstraksi dipotong di daerah servikal untuk mengambil mahkota email. Setelah dilakukan saliva coated pada mahkota email, mahkota kemudian diinokulasi kedalam 24 well-plate yang berisi bakteri Streptococcus mutans yang telah dikultur selama 24 jam. Ekstrak etanol biji alpukat diencerkan menjadi 3 konsentrasi yaitu 25%, 12,5% dan 6,25%. CHX (0,2%) sebagai kontrol positif dan 0,1 N NaOH sebagai kontrol negatif. Mahkota yang diinokulasi kemudian direndam ke dalam konsentrasi selama 30 menit. Kemudian, koloni bakteri dihitung menggunakan metode RT-PCR dan Plate Count sebagai pembanding. Hasil: Ekstrak etanol biji alpukat dari setiap kelompok konsentrasi dapat mengurangi pertumbuhan biofilm S.mutans. konsentrasi 25% dan 12,5% berbeda signifikan dengan kontrol negatif (p < 0,05). Konsentrasi terbaik untuk mengurangi perlekatan biofilm adalah 25%. Kesimpulan: Ekstrak etanol biji alpukat dapat menghambat pertumbuhan biofilm S.mutans. . Penelitian lebih lanjut diperlukan terhadap in vivo, studi klinis maupun uji toksisitas dalam pemakaian jangka panjang.