Induksi apoptosis galur sel osteosarkoma mg-63 oleh asam kafeat melalui caspase secara spesifik : Analisis dapi
A Asam kafeat adalah komponen dari fenolik alami yang dapat di temukan pada buah, sayuran, bumbu, dan kopi. Asam kafeat telah terbukti dapat menginduksi apoptosis pada galur sel osteosarkoma MG-63 yang berpotensi sebagai anti-osteosarkoma. Telah dilaporkan bahwa apoptosis yang diinduksi oleh asam kafeat pada sel osteosarkoma MG-63 melibatkan aktivasi caspase. Namun, belum pemah dilaporkan apakah caspase odalah jalur spesifik menuju apoptosis. Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan bahwa asam kafeat menginduksi apoptosis yang ditandai dengan adanya perubahan kromosom secara metode 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), pada sel osteosarkoma melalui jalur pensinyalan caspase secara spesifik. Sel MG-63 dibagi menjadi 3 kelompok. Pada kelompok kontrol negatif, sel MG-63 diberikan pelarut sebanyak volume inhibitor selama 2 jam, lalu diberikan pelarut sebanyak volume asam kafeat selama 48 jam, pada kelompok kontrol positif sel MG-63 diberikan pelarut sebanyak volume inhibitor selama 2 jam, lalu diberikan asam kafeat dengan konsentrasi 10 pg/mL selama 48 jam, dan pada kelompok perlakuan sel MG-63 diberi perlakuan Z-VAD FMK dengan konsentrasi 100 pM selama 2 jam lalu asam kafeat dengan konsentrasi 10 pg/mL selama 48 jam selanjutnya di fiksasi dan diuji dengan pewamaan DAPI dan diobservasi dengan mikroskop fluoresensi. Hasil pewamaan DAPI menunjukkan bahwa dengan dihambatnya caspase menggunakan Z-VAD FMK, apoptosis tidak terjadi pada sel sehingga hal ini membuktikan bahwa asam kafeat menginduksi apoptosis pada sel osteosarkoma melalui jalur pensinyalan caspase secara spesifik (p<0,05).
C Caffeic acid, a natural phenolic component, can be found in fruits, vegetables, spices, and coffee. Caffeic acid has been shown to induce apoptosis in MG-63 osteosarcoma cell lines, therefore potential as anti-osteosarcoma. It has been reported that caffeic acid-induced apoptosis in MG-63 cells involves activation of caspase. However, it has not been reported whether caspase is the specific signal toward apoptosis. This study aims to prove that caffeic acid induces apoptosis in MG63 cells through specific caspase signaling pathways, characterized by a change of chromosome with 4 6-diamidino-2- phenylindole (DAPI) method. MG-63 cells are divided into 3 groups. For negative control group, cells were treated with addition of solvent as much as inhibitor volume for 2 hours and followed by addition of solvent as much as caffeic acid volume for 48 hours. For positive control group, cells were treated with addition of solvent as much as inhibitor volume for 2 hours and followed by addition of 10 pg/mL caffeic acid for 48 hours. For treated group, cells were treated with addition of lOOpM Z-VAD FMK for 2 hours and followed by addition of 10 pg/mL caffeic acid for 48 hours. Cells were then fixed, stained with DAPI and observed under fluorescent microscope. DAPI staining results showed apoptosis did not occur with the attenuation of caspase by Z-VAD FMK. Taken together, caffeic acid induces apoptosis in osteosarcoma cells through specific caspase signaling pathway (p<0,05).