L Latar Belakang: Kanker merupakan salah satu penyebab utama kematian di dunia yang dapat ditemukan hampir di setiap negara, salah satunya Indonesia. Kanker mulut menduduki urutan ke-6 dari keseluruhan jenis kanker di Indonesia. Kanker rongga mulut dengan 90% kejadian terbanyak adalah karsinoma sel skuamosa (KSS), keganasan ini muncul pada epitel skuamosa yang melapisi rongga mulut, salah satunya pada lidah. Asam valproat yang sebagai obat anti konvulsan yang dapat diperoleh dari bahan alam, memiliki peran dalam menghambat aktivitas histone deacetylase (HDAC) dalam meningkatkan pembentukan ROS. Stabilitas dan efektifitas asam valproat sebagai agen antikanker dapat ditingkatkan melalui proses enkapsulasi dan modifikasi fisik menjadi nanopartikel. Nano enkapsulasi asam valproat dengan kitosan dapat berpotensi dikembangkan sebagai obat antikanker masa depan. Tujuan: Untuk mengetahui pengaruh nano enkapsulasi asam valproat dengan kitosan terhadap produksi Reactive Oxygen Species (ROS) pada sel kanker HSC-3. Metode: Penelitian eksperimental laboratorik in vitro menggunakan enkapsulasi asam valproat dan nano kitosan pada sel HSC-3. Penelitian ini terbagi menjadi 10 kelompok, 5 kelompok kontrol dan 5 kelompok perlakuan dengan konsentrasi 100%, 75%, 50%, 25% dan 12,5%. Hasil: pada kelompok enkapsulasi asam valproat dengan nano kitosan konsentrasi 100%, 75%, dan 50% tidak memperlihatkan perbedaan nyata (p>0.05), namun pada kelompok konsentrasi 25% dan 12.5% memperlihatkan perbedaan nyata p<0.05 dengan kelompok konsentrasi 100%. Kelompok konsentrasi 100% memiliki jumlah produksi ROS yang paling tinggi dibandingkan konsentrasi lainnya. Kesimpulan: Enkapsulasi nano kitosan dengan asam valproat efektif dalam menyebabkan stress oksidatif pada HSC-3, melalui peningkatan produksi ROS, semakin tinggi konsentrasi enkapsulasi yang diberikan semakin tinggi dalam produksi ROS.