L Latar Belakang: Kanker rongga mulut merupakan kanker dengan prognosis buruk dikarenakan kerlambatan dalam diagnosis. Sebanyak lebih dari 90% kanker rongga mulut merupakan karsinoma sel skuamosa. Human Squamous Cell 3 (HSC-3) cenderung bersifat agresif dengan pertumbuhan cepat dan mampu menginvasi jaringan sekitarnya serta bermetastasis ke nodus limfa. Pendekatan bahan alam yang berpotensi sebagai agen kemoterapi selektif melalui kajian antioksidan menjadi suatu alternatif, seperti penggunaan antioksidan pada daun serai dapur (Cymbopogon citratus). Tujuan: Untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol daun serai dapur terhadap aktivitas antioksidan dalam mempengaruhi sitotoksisitas, viabilitas, proliferasi dan percepatan migrasi galur sel HSC-3. Metode: Penelitian eksperimental laboratorik in vitro menggunakan galur sel HSC-3. Dibagi menjadi 9 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif, kontrol pelarut (metanol 0,04%), kontrol positif (DMSO 10%) dan kontrol perlakuan ekstrak daun serai dapur konsentrasi 25,50,100,200,300 dan 400 μg/mL. Uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH), uji sitotoksisitas, viabilitas dan proliferasi menggunakan metode kolorimetri dengan CCK-8/WST-8 pada panjang gelombang 450 nm, dan uji migrasi dilakukan dengan metode scratch wound healing. Hasil: Ekstrak etanol daun serai dapur memiliki aktivitas antioksidan dalam kategori sedang dengan nilai IC50 103,65 μg/mL. Nilai IC50 sitotoksisitas dalam kategori sedang sebesar 73,69 μg/mL, mampu menurunkan viabilitas, proliferasi serta percepatan migrasi galur sel HSC-3, yang sedikit lebih baik dari kontrol positif meskipun tidak berbeda signifikan. Kesimpulan: Ekstak etanol daun serai dapur memiliki aktivitas antioksidan sedang dengan sitotoksisitas yang sedang yang dapat menurunkan viabilitas, proliferasi dan percepatan migrasi sel HSC-3, dengan konsentrasi terbaik pada 300 μg/mL. Kemudian, terdapat korelasi antara aktivitas antioksidan dengan antikanker.