L Latar Belakang: Kanker merupakan salah satu penyebab utama kematian di dunia.Kanker rongga mulut dengan 90% kejadian terbanyak adalah karsinoma selskuamosa (KSS). Karsinoma sel skuamosa pada lidah paling sering ditemukan danmempunyai prognosis yang buruk. Asam valproat merupakan obat antikonvulsanyang berperan dalam modifikasi histon selama proses proliferasi dan diferensiasisel. Asam valproat dapat menghambat aktivitas histone deacetylase (HDAC) danmeningkatkan pembentukan ROS sehingga berpotensi dikembangkan sebagai obatantikanker masa depan. Tujuan: Untuk mengetahui pengaruh asam valproat dalammeningkatan produksi Reactive Oxygen Species (ROS) pada sel kanker lidah (HSC3). Metode: Penelitian eksperimental laboratorik in vitro menggunakan asamvalproat pada sel HSC-3. Penelitian ini terdiri atas 4 kelompok yaitu kelompokpertama adalah kelompok kontrol yaitu sel HSC-3 yang tidak diberikan perlakukan,kelompok kedua, ketiga, dan keempat adalah sel HSC-3 yang diberikan asamvalproat masing-masing 200, 400, dan 600 ppm. Hasil: Adanya perbedaan yangnyata (p<0,05) antara kelompok kontrol dengan kelompok 200 dan 600 ppm,sedangkan kelompok 400 ppm tidak menunjukkan perbedaan yang nyata dengankelompok kontrol. Kelompok yang diberikan asam valproat dengan konsentrasi200, 400, dan 600 ppm memperlihatkan peningkatan produksi ROS dibandingkandengan kelompok kontrol masing-masing sebesar 18,83%, 7,96%, dan 17,45%.Hasil pengujian produksi ROS pada sel HSC-3 yang dipelajari di bawah mikroskopfluoresensi memperlihatkan sel positif dan hijau dalam jumlah rendah di kelompokkontrol, sedangkan pada kelompok perlakuan asam valproat memperlihatkanpeningkatan produksi ROS. Kesimpulan: Asam valproat dapat meningkatkanproduksi Reactive Oxygen Species (ROS) pada sel kanker lidah (HSC-3).