K Kanker mulut merupakan suatu penyakit mematikan yang prevalensinya semakin lama semakin meningkat. Menurut WHO tahun 2003, menyirih merupakan salah satu penyebab kanker mulut. Menyirih merupakan proses pengunyahan dari sirih pinang, dan kapur. Diketahui di berbagai daerah di Indonesia, komposisi dari campuran sirih dapat menggunakan bahan-bahan yang berbeda, hal ini mungkin dapat menyebabkan efek yang berbeda-beda. Penggunaan buah sirih (P. betle inflorenscence) digunakan di beberapa daerah di Indonesia bagian Timur, oleh karena itu pada penelitian ini perlu diketahui bagaimana efek sitotoksik dari campuran ekstrak buah sirih, buah pinang, dan kapur dengan atau tanpa penambahan enzim amilase. Metode yang digunakan adalah uji laboratorik dan dilakukan pada campuran ekstrak dalam berbagai konsentrasi pada sel HeLa dengan uji MTT-Assay dalam periode inkubasi 24 dan 48 jam dengan dan tanpa enzim amilase untuk menguji sitotoksisitas ekstrak. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sitotoksisitas campuran ekstrak tanpa enzim amilase ditemukan pada konsentrasi 60 µg/ml dalam masa inkubasi 48 jam. Sedangkan pada perlakuan campuran ekstrak yang disertai enzim amilase terjadi penurunan jumlah sel pada konsentrasi 120 µg/ml dalam masa inkubasi 24 dan 48 jam. Kesimpulan: ekstrak campuran buah sirih, buah pinang, dan kapur dengan atau tanpa enzim amilase bersifat sitotoksik terhadap sel HeLa, serta ekstrak lebih bersifat sitotoksik dalam waktu inkubasi yang lebih lama.