K Kumbang tanduk (Xylotrupes Gideon) merupakan hama utama yang dikenal sebagai pengerek kelapa sawit. Ekskeleton dari Xylitourupes Gideon dimanfaatkan sebagai bahan polimer alami yang dapat di deasitilisasi menjadi kitosan. Kitosan mempunyai kemampuan untuk mempertahankan kekerasan email gigi pada saat proses demineralisasi, salah satunya diakibatkan oleh minuman berkarbonat. Kitosan juga mengalami demineralisasi yang menghasilkan suatu partikel nano kalsium, dimana kalsium ialah salah satu komponen utama pada email yang fungsinya mempertahankan kekuatan gigi. Ukuran partikel kalsium dan kitosan dimodifikasi menjadi nano agar kerjanya dapat lebih optimal. Penelitian yang dilakukan adalah ekperimental berupa uji laboratoris (in vitro). Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh pretreatment nano kalsium dan nano kitosan kumbang tanduk pada perendaman minuman berkarbonat terhadap kekerasan email gigi. Sampel dibagi menjadi empat kelompok perlakuan yaitu; kelompok tanpa pemberian kitosan dan kalium/saliva (K0), kelompok yang diberikan minuman bikarbonat tanpa pemberian nano kitosan dan nano kalsium (K2), kelompok yang hanya diberikan kitosan pada konsentrasi 4000, 6000, dan 8000 ppm, kelompok yang diberikan kombinasi nano kitosan dan nano kalsium dengan konsentrasi 4000, 6000, dan 8000 ppm. Perlakuan Uji Kekerasan email gigi diukur dengan menggunakan uji Vicker Hardness pada sebelum dan sesudah dilakukan perlakuan selama 7 hari,. Hasil uji Anova menunjukkan adanya perbedaan yang nyata (p<0.05) pada kelompok kontrol positif dan kontrol negatif dengan kelompok yang diberikan pretreatment nano kitosan dan campuran nano kitosan dan nano kalsium. Hasil dari penelitian menunjukkan bahwa terdapat pengaruh pretreatment nano kitosan dan nano kalsium kumbang tanduk pada minuman berkarbonasi terhadap kekerasan email gigi.