E Enterococcus faecal is dan Candida albicans adalah mikroorganisme yang dapat menyebabkan infeksi saluran akar. Probiotik Lactobacillus reuteri dilaporkan mampu menghambat pertumbuhan mikroorganisme tersebut. Oleh karena itu penelitian ini bertujuan untuk memaparkan pengaruh dari bakteri L. reuteri, khususnya strain Indonesia, baik dengan maupun tanpa penambahan gliserol, terhadap jumlah biofilm E. faecal is dan C. albicans. Penelitian ini dilakukan dengan metode biofdm assay. E. faecalis ATCC 29212 dan C. albicans ATCC 10231 dikultur dengan BUI broth, kemudian didistribusikan ke dal am 96 well-plate dan diinkubasi selama 24 jam dalam suasana anaerob (E. faecalis) maupun aerob (C. albicans). L. reuteri BEA 230424 dikultur dengan MRS broth, kemudian dibagi menjadi dua kelompok yaitu L. reuteri tanpa penambahan gliserol dan L. reuteri dengan penambahan gliserol, lalu diencerkan hingga mencapai konsentrasi yang berbeda-bcda (lxlQ8, 1x10*’, dan lxlO4 CFU/ml.). Kultur tersebut kemudian didistribusikan ke dalam well-plate dan diinkubasi selama 1 jam, 3 jam, 6 jam, dan 24 jam. Setelah itu, optical density diukur menggunakan microplate reader dengan panjang gelombang 490 nm. Hasil dari penelitian ini yang dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA satu jalan dan Post-hoc HSD, menyatakan bahwa setiap konsentrasi L. reuteri strain Indonesia mampu menghambat petumbuhan secara signifikan pada biofilm E. faecalis dan C. albicans. Pada L. reuteri dengan penambahan gliserol, tampak menghambat pertumbuhan biofilm E. faecalis lebih signifikan dibandingkan dengan L. reuteri tanpa penambahan gliserol. Namun, tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan antara L. reuteri dengan dan tanpa penambahan gliserol dalam menghambat pertumbuhan biofilm C. albicans.