K Kegagalan perawatan endodontik dapat menyebabkan lesi periapikal seperti periodontitis apikalis, etiologi utamanya adalah Enterococcus faecalis dan Candida albicans yang persisten pada saluran akar. Larutan irigasi yang menjadi gold standard perawatan endodontik adalah natrium hipoklorit, namun efek samping natrium hipoklorit adalah dapat mengiritasi dan toksik terhadap jaringan periodontal. Minyak atsiri cendana (Santalum album L.) memiliki sifat antimikroba dan antifungal. Tujuan: Untuk mengetahui kemampuan ekstrak cendana dalam menghambat pertumbuhan dan biofilm Enterococcus faecalis dan Candida albicans. Metode Penelitian: E. faecalis dan C. albicans dikultur pada mediumnya pada suhu 37oC selama 24 jam. Pembuatan biofilm dilakukan dengan menginokulasi kultur ke dalam 96-well-plate dan diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Minyak atsiri dilarutkan hingga tercapai konsentrasi 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, dan 3,125%. Konsentrasi 100% didapatkan dari minyak atsiri murni. Uji antimikroba dilakukan dengan metode mikrodilusi dengan masa inkubasi 24 jam dan uji biofilm dilakukan dengan metode biofilm assay dengan masa inkubasi 1, 3, 24 jam dengan kontrol positif NaOCl 2,5% dan 5%. Hasil uji biofilm dilihat menggunakan microplate reader dengan panjang gelombang 490nm. Hasil: Jumlah koloni E. faecalis terendah dalam waktu inkubasi 24 jam adalah pada 6,25% dan C. albicans adalah pada 100%. Densitas biofilm E. faecalis terendah adalah pada konsentrasi 3,125% dengan masa inkubasi 1 jam, dan 12,5% pada masa inkubasi 3 dan 24 jam dan untuk densitas biofilm C. albicans terendah adalah pada konsentrasi 12,5% pada masa inkubasi 1, 3, 24 jam. Kesimpulan: Minyak atsiri kayu cendana terbukti dapat menghambat pertumbuhan dan biofilm E. faecalis dan C. albicans.