L Latar Belakang : Kulit biji buah Borassus flabellifer L. mengandung antioksidan yang dapat menetralisir efek toksik dari radikal bebas dan dapat melawan kerusakan DNA akibat paparan stres oksidatif. Ekstrak etanol B.flabellifer terbukti memiliki efek sitotoksik dan dapat menghambat pertumbuhan beberapa jenis sel kanker seperti lini sel HeLa, EAC, dan DAL. Tujuan : Untuk mengetahui efek sitotoksisitas ekstrak etanol 70% kulit biji buah Borassus flabellifer L. terhadap lini sel HSC-3. Metode : Penelitian eksperimental laboratorik dilakukan menggunakan lini sel HSC-3 yang diberikan perlakuan dengan ekstrak kulit biji buah B.flabellifer pada konsentrasi 93,75 μg/mL, 187,5 μg/mL, 375 μg/mL, 750 μg/mL, dan 1.500 μg/mL, kontrol negatif, dan kontrol positif Doksorubisin 3 μM. Kemudian dilakukan uji sitotoksisitas menggunakan CCK-8. Viabilitas lini sel HSC-3 diukur menggunakan microplate reader dengan panjang gelombang 450 nm. Hasil : Ekstrak kulit biji B.flabellifer mampu menurunkan viabilitas dan bersifat sitotoksik terhadap lini sel HSC-3 pada konsentrasi 93,75 μg/mL, 187,5 μg/mL, 375 μg/mL, 750 μg/mL, dan 1.500 μg/mL, dengan nilai IC50 141,9 μg/mL. Kesimpulan : Ekstrak kulit biji B.flabellifer dapat menurunkan kemampuan lini sel HSC-3 untuk bertahan hidup melalui penghambatan proliferasi sel kanker sehingga memiliki efek sitotoksisitas terhadap lini sel HSC-3 secara signifikan pada konsentrasi 1.500 μg/mL.