L Latar Belakang: Periodontitis adalah kondisi peradangan yang berawal dari gingivitis yang tidak dirawat, berlanjut dengan hilangnya perlekatan jaringan periodontal disertai resorpsi tulang alveolar. Porphyromonas gingivalis dan Fusobacterium nucleatum merupakan sebagian bakteri pada subgingiva yang menyebabkan periodontitis. Kontrol plak adalah perawatan inisial yang dapat dilakukan untuk membuang plak dengan cara mekanis seperti sikat gigi dan pembersih interdental, sedangkan secara kimiawi dengan obat kumur antibakteri. Daun inai (Lawsonia inermis L.) diketahui memiliki kandungan antibakteri yang terbukti dapat menyembuhkan gingivistis. Ekstrak daun inai mengandung alkaloid, saponin, tanin, fenolik, flavonoid, triterpenoid, dan glikosida yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Tujuan: Mengetahui efektivitas daya hambat ekstrak etanol daun inai sebagai antibakteri terhadap P. gingivalis dan F. nucleatum. Metode: Penelitian eksperimental laboratoris dengan metode dilusi cair, menggunakan biakan P.gingivalis ATCC 33277 dan F. nucleatum ATCC 25586. Bahan uji adalah ekstrak daun inai yang dibagi menjadi 6 konsentrasi yaitu 100%, 50%, 25%, 12.5%, 6.25% dan 3.125%. Uji antibakteri dilakukan dengan menghitung total koloni bakteri yang diperoleh dengan menggunakan rumus rata-rata jumlah koloni bakteri. Hasil: Pada pengujian ekstrak daun inai terhadap P.gingivalis dan F. nucleatum didapatkan rata-rata jumlah koloni terkecil terdapat pada konsentrasi 100% {13.75 (SD ± 4.65) dan 30.75 (SD ± 16.86)} dan jumlah koloni terbanyak terdapat pada konsentrasi 3.125% {95 (SD ± 32.36) dan 1000}. Kesimpulan: Ekstrak daun inai efektif menghambat pertumbuhan P.gingivalis dan F. nucleatum pada konsentrasi 100% hingga 3.125%.