L Latar Belakang: Penyebab utama kegagalan perawatan saluran akar adalahadanya kelangsungan hidup mikroorganisme. Salah satu bakteri penyebabkegagalan perawatan saluran akar adalah Staphylococcus aureus (ATCC 25923).S. aureus merupakan salah satu satu mikroorganisme resisten penting yang seringdiisolasi dari perawatan saluran akar. Tanaman alpukat (P. americana) merupakanbahan alam yang banyak ditemukan di Indonesia. Daun alpukat memiliki senyawaaktif seperti flavonoid, steroid, tanin dan kuinon yang berperan sebagaiantibakteri. Tujuan: Mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun P. americanaterhadap S. aureus. Metode: Penelitian ini adalah eksperimental laboratoris secarain vitro menggunakan metode difusi cakram. Ekstrak daun P. americana didapatdengan metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Meletakkan cakram kertasyang telah dicelupkan dalam larutan ekstrak daun P. americana konsentrasi6,25%, 12,5%, 25%, 50% dan 100% serta sodium hipoklorit 5,25% sebagaikontrol positif dan DMSO 10% sebagai kontrol negatif, di atas media padat yangtelah diinokulasi dengan bakteri S. aureus. Pertumbuhan bakteri dilihat setelahinkubasi selama 24 jam untuk mengukur zona bening yang terbentuk di sekitarcakram. Hasil: Ekstrak daun P. americana dapat menghambat pertumbuhanbakteri S. aureus pada konsentrasi 6,25%, 12,5% dan 25% dengan zona hambatmasing-masing 11,19 mm, 11,63 mm dan 10,74 mm, sedangkan pada konsentrasi50% dan 100% tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus. Hasil ujione way ANOVA menunjukkan adanya perbedaan bermakna (p<0,05) sedangkanpada uji Post Hoc menunjukkan tidak ada perbedaan bermakna (p>0,05).Kesimpulan: Penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak daun P. americanamempunyai daya hambat terhadap S. aureus pada konsentrasi rendah dan dapatberguna sebagai bahan alternatif irigasi saluran akar.