L Latar Belakang: Karsinoma sel skuamosa oral (KSSO) adalah jenis tumor yang umum di rongga mulut dengan prognosis yang umumnya buruk dan tingkat kelangsungan hidup 5 tahun secara keseluruhan kurang dari 50%. Salah satu ekstrak tanaman dapat berperan sebagai pengobatan alternatif kanker adalah Catharanthus roseus atau dikenal dengan sebutan tapak dara. Tujuan: Untuk mengetahui potensi ekstrak etanol daun C. roseus terhadap viabilitas dan apoptosis pada lini sel karsinoma sel skuamosa HSC-3. Metode: Penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratorium secara in vitro. Sampel terbagi menjadi 4 kelompok perlakuan yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif dengan diberikan doksorubisin 3 μM, kelompok perlakuan ekstrak etanol C. roseus dengan konsentrasi 6,25 μg/mL, 12,5 μg/mL, 25 μg/mL, dan 50 μg/mL. Dilakukan uji MTT untuk melihat viabilitas sel dan uji flow cytometry untuk melihat atau mengukur apoptosis. Hasil: Ekstrak etanol daun C. roseus dapat menurunkan viabilitas dan menimbulkan apoptosis lini sel karsinoma sel skuamosa HSC-3 secara signifikan. Ekstrak etanol daun C. roseus menghasilkan IC50 dengan nilai 37,22 μg/mL pada uji MTT dan 38,70 μg/mL pada uji flow cytometry. Kesimpulan: Ekstrak etanol daun C. roseus dapat menurunkan viabilitas dan meningkatkan apoptosis lini sel karsinoma sel skuamosa HSC-3.