N Nano kitosan yaitu kitosan yang memiliki partikel yang berbentuk padat dengan ukuran sekitar 10 - 1000 nm. Chitosan dalam bentuk nanopartikel ini pun bersifat netral, tidak toksik, dan memiliki stabilitas yang konstan, yang memiliki sifat unggul seperti biodegradability, biocompatibility, non-toxicity, dan terserap. Kitosan berasal dari cangkang hewan laut, jamur, dan serangga seperti kumbang. Pada penelitian ini digunakan kitosan dari cangkang kumbang tanduk (Xylotrupes gideon). Modifikasi fisik kitosan dan kalsium menjadi nanopartikel dapat meningkatkan aktivitasnya dalam obat kumur. Bakteri Staphylococcus aureus diduga menjadi patogen dari berbagai penyakit mulut seperti oral mucositis, peri- implantitis, infeksi endodontik, periodontitis, bahkan karies gigi. Tujuan penelitian ini mengetahui efektifitas dan perbedaan konsentrasi formulasi obat kumur berbasis nanopartikel kitosan dan kalsium dari eksoskeleton kumbang tanduk (X. gideon) terhadap bakteri Staphylococcus aureus. Penelitian tahap awal membuat formulasi obat kumur, lalu tahap berikutnya menentukan konsentrasi obat kumur nano kitosan dan nano kalsium terbaik menghambat bakteri yaitu 50% (sedang). Hasil uji organoleptik diperoleh kesukaan varian satu dengan rasa dan aroma peppermint, lalu hasil uji fisikokimia meliputi: pH, viskositas, kejernihan, warna dan ukuran partikel cukup stabil. Formulasi obat kumur nano kitosan dan nano kalsium berbagai konsentrasi diuji dengan metode dilusi terhadap S. aureus. Hasil KHM dan KBM terdapat pada konsentrasi 7,81 ppm (1,56%) dan 15,63ppm (3,125%). Dari hasil uji statistik disimpulkan terdapat perbedaan KHM dan KBM pada konsentrasi yang berbeda.