C Calotropis gigantea merupakan tanaman yang bermanfaat bagi kesehatan tetapi penelitian mengenai aplikasinya di bidang kedokteran gigi masih sangat sedikit. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol daun Calotropis gigantea terhadap perlekatan Streptoccocus mutans pada basis akrilik. Metode penelitian yang digunakan pada penelitian ini adalah eksperimental laboratoris dengan merendam basis akrilik yang telah diinokulasi dengan Streptoccous mutans menggunakan larutan ekstrak. Hasil analisa LC-MS/MS dari ekstrak Calotropis gigantea menunjukkan adanya isoramnetin glikosida, saponin, asam amino, kolin, senyawa alkaloid dan antraquinon glikosida. Hasil penelitian menunjukkan jumlah rata-rata koloni Streptococcus mutans yang melekat pada basis akrilik setelah direndam dalam larutan ekstrak dengan konsentrasi 6,25, 12,5, 25, 50, 100 dan 200 mg/mL secara berturut-turut adalah (119,3±4,93) x 102 CFU/mL, (77,0 ± 2,65) x 102 CFU/mL, (37,3 ± 3,06) x 102 CFU/mL, (27,3 ± 5,50) x 102 CFU /mL , (8,0 ± 2,00) x 102 CFU/mL, dan (2,6 ± 2,08) x 102 CFU/mL. Pengujian statistik menunjukkan terdapat perbedaan bermakna hampir pada semua kelompok konsentrasi ekstrak yang diuji (p < 0,05) kecuali antara konsentrasi 200 mg/mL dan 100 mg/mL (p = 0,104), tidak ditemukan perbedaan bermakna antara konsentrasi 200 mg/mL dengan kontrol positif dan adanya korelasi bermakna dengan nilai negatif dan kuat (p= 0,000 , r = - 0,748) diantara kedua variabel. Kesimpulan: terdapat pengaruh ekstrak etanol daun Calotropis gigantea terhadap perlekatan Streptococcus mutans pada basis akrilik.