L Limbah kertas umumnya tidak dimanfaatkan dan dibuang begitu saja. Menumpuknya limbah kertas dapat menyebabkan dampak buruk bagi lingkungan, baik dari segi keindahan maupun dari segi kesehatan yang dapat menyebabkan sumber penyakit, sehingga limbah kertas perlu diolah menjadi produk yang lebih bermanfaat. Penelitian ini dilakukan dengan tujuan membandingkan efektifitas biokatalisator dengan katalisator kimia dalam proses delignifikasi dan hidrolisis, menentukan rasio fungi sebagai biokatalisator terhadap bubur kertas untuk memperoleh kandungan glukosa paling tinggi dan menentukan waktu kontak pada proses pembentukan bioethanol yang menghasilkan glukosa dan ethanol paling banyak. Biomassa lignoselulosa merupakan sumber daya yang dapat diperbarui sebagai bahan baku bioethanol. Fungi Aspergillus fumigatus dan ragi Saccharomyces cerevisiae sebagai biokatalisator dikultivasi pada media Potato Dextrose Broth (PDB) dan Yeast Extract Glucose Peptone (YEGP). Penelitian diawali dengan melakukan preparasi limbah kertas HVS secara mekanis hingga menjadi bubur kertas (substrat). Tahap delignifikasi sebagai pretreatment dilakukan dengan menggunakan variasi perbandingan substrat:biokatalisator= 1:1, 1:5, dan1:10 pada waktu kontak 24, 72, dan 120 jam. Pengukuran kadar lignin dilakukandengan menggunakan metode gravimetri. Tahap hidrolisis dilakukan dengan menggunakan variasi perbandingan substrat:biokatalisator= 1:1, 1:5, dan 1:10 pada waktu kontak 24, 72, dan 120 jam. Pengukuran konsentrasi glukosa dilakukan dengan menggunakan metode 3,5-dinitrosalisilat (DNS). Tahap fermentasi dilakukan dengan menggunakan variasi perbandingan substrat:biokatalisator= 1:1,1:2, dan 2:1 pada waktu kontak 72, 120, dan 168 jam. Tahap destilasi dilakukansetelah tahap fermentasi sehingga dapat diukur kandungan ethanol dengan menggunakan alat Gas Chromatography Mass Stretoscopy (GC-MS). Pada tahap pretreatment, diperoleh penyisihan kadar lignin tertinggi sebesar 98 %. Gula tertinggi pada tahap hidrolisis sebesar 1,288 g/L pada variasi substrat:biokatalisator= 1:10 dengan waktu kontak 120 jam. Hasil ethanol terbaik sebesar 36,64% pada perbandingan 1:2 dan waktu kontak 120 jam. Penelitian ini memberikan informasi bahwa limbah kertas HVS dapat diproduksi menjadi bioethanol melalui proses - proses yang melibatkan fungi Aspergillus fumigatus dan ragi Saccharomyces cerevisiae.