P Pemanfaatan minyak bumi memberikan dampak positif terhadap kesejahteraanmasyarakat, tetapi juga memberikan dampak negatif yaitu pencemaran bagilingkungan. Salah satu pencemaran akibat tumpahan minyak bumi yang seringterjadi di Indonesia adalah pada tanah yang dapat menyebabkan turunnyaproduktivitas tanah, pencemaran air tanah, dan membahayakan kesehatan makhlukhidup. Penelitian ini bermaksud untuk mengatasi tumpahan minyak bumi dengancara pendekatan biologi yaitu bioremediasi dan bertujuan untuk untuk (1)menentukan fase eksponensial pertumbuhan kultur campuran fungi Aspergillusniger dan Trichoderma harzianum; (2) mengetahui sentivitas kultur campuran fungiAspergillus niger dan Trichoderma harzianum terhadap minyak bumi; (3)menentukan kondisi lingkungan optimum yang memberikan efisiensi paling tinggidalam penyisihan Total Petroleum Hydrocarbon (TPH), berdasarkan variasi pHdan Td; dan (4) menghitung efisiensi penyisihan TPH pada media cair dan mediatanah dengan kondisi terkontrol. Metode dalam penelitian ini dibagi menjadi 3tahap, yaitu; tahap kultivasi dan uji sensitivitas, uji degradasi minyak bumi padamedia cair, dan uji degradasi minyak bumi pada media padat. Uji degradasi minyakbumi dilakukan batch culture dalam skala laboratorium dengan kondisi lingkunganyang terkontrol. Inkubasi dilakukan pada shaker incubator dengan kecepatan putar150 rpm dan suhu 30 oC. Variasi yang dilakukan pada penelitian ini adalah variasipH (5, 6, dan 7) dan waktu kontak Td (7, 14, dan 21 hari). Kultur campuran fungiyang digunakan dalam perlakuan uji degradasi TPH dalam minyak bumi yaitu padafase eksponensial hari ke-6. Hasil dari tahap uji sensitivitas pada penelitian inimenunjukkan bahwa kultur campuran fungi Aspergillus niger dan Trichodermaharzianum bersifat tidak peka terhadap kehadiran minyak bumi. Hasil penyisihanTPH pada media cair mencapai 93,73% dengan kondisi lingkungan optimum pH 7dan waktu kontak selama 7 hari, sedangkan penyisihan TPH pada media padatmencapai 92,42% dengan waktu kontak selama 21 hari dengan kinetika penyisihanmenggunakan orde 1 dengan persamaan Y = 0,0000000662x + 2,315 dengan nilaiR2sebesar 0,8749. Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa kultur campuranfungi Aspergillus niger dan Trichoderma harzianum mampu menyisihkankonsentrasi TPH dalam minyak bumi.