K Kitosan merupakan biopolimer alami hasil deasetilasi kitin yang dapat ditemukan pada serangga kumbang tanduk Xylotrupes gideon dengan kandungan sebanyak 83,43%. Modifikasi kitosan secara fisik menjadi nanopartikel dapat meningkatkan aktifitas kitosan sebagai antikanker dan pembawa obat. Kitosan dapat dimanfaatkan dalam bidang kedokteran gigi karena bersifat non toksik, biokompatibilitas, dan biodegradabilitas. Sel HSC-3 merupakan cell line karsinoma sel skuamosa rongga mulut yang paling sering ditemukan pada lidah. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh nano kitosan terhadap viabilitas, sitotoksisitas, proliferasi, dan migrasi sel HSC-3. Pengujian dilakukan menggunakan nano kitosan dengan konsentrasi berbeda yang terbagi menjadi empat kelompok yaitu 200ppm, 400ppm, 600ppm, dan tanpa paparan nano kitosan. Pengukuran viabilitas, sitotoksisitas, dan proliferasi sel menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 450nm, sedangkan migrasi sel dianalisis dengan software T-scratch. Hasil penelitian menunjukkan perbedaan yang signifikan (p<0,05) antara sel HSC-3 yang diberikan nano kitosan dibandingkan dengan kontrol. Nano kitosan mampu menurunkan viabilitas sel, meningkatkan sitotoksisitas, dan menghambat proliferasi sel HSC-3. Pada hasil uji migrasi, paparan nano kitosan dengan konsentrasi 200ppm, 400ppm, dan 600ppm mampu mempengaruhi percepatan migrasi sel HSC-3, dengan semakin tinggi konsentrasi semakin menurun kemampuan migrasi sel HSC-3. Hasil penelitian mem perl ihatkan semakin tinggi kosentrasi nano kitosan, semakin menghambat pertumbuhan sel dan menghambat migrasi sel HSC-3.